麦氏比浊管估计悬液中的细菌浓度

        在我们日常的微生物检测工作和进行的某些实验中，经常会遇到需要预估细菌悬液的细菌浓度问题，有时候我们需要精确计数细菌菌液浓度，会用到血球计数板来进行计数；但有时我们只需要一个比较粗略的估计值即可，这里小编推荐大家使用麦氏比浊法。

麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的，有表可查，这样不同比例生成的硫酸钡沉淀的浓度不同，且都有定值。麦氏比浊管的配比如下：

这是传统的麦氏比浊管的配制方法，目前也有市售的商品化产品，不需要自己配制，并且还有由乳胶粒子悬浮液制成的麦氏比浊管，与传统的麦氏比浊管相比，保存时间更长也更稳定。但麦氏比浊管具体应该怎么使用呢？

麦氏比浊管估计悬液中的细菌浓度具体操作方法

1、轻摇标准试管。

2、无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。

3、以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水（NaCl），直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。

4、直接用眼睛看（需要经验，误差较大）。

5、找张白纸，打上平行直线，然后观察读数（如图示，利用光在不同浓度液体折射不同）。

例如，需配大约100cfu/mL 的细菌菌液浓度：

1. 无菌操作用接种环挑取测试细菌的纯培养物到盛有一定量无菌生理盐水管中，混悬。

2. 以比色卡作为背景目测，直到浊度与0.5 麦氏比浊标准管的浊度相一致，如上图所示。

3. 0.5 号麦氏浊度标准管相当于1×108CFU/mL 浓度，以此为参照值，取1mL 浊度跟0.5 号麦氏浊度标准管相一致的菌悬液到9mL 无菌生理盐水管中，作10 倍梯度稀释107、106、105……，102 稀释度含菌量大约为100cfu/mL。

注：1. 测试菌的纯培养物可以是冻干菌株复苏后纯培养物。

       2.本法仅供细菌液浓度的粗略计算。

注意事项：

1、如果测定的肉汤培养物不澄清，由培养物的值减去未接种培养基的值来校正细菌浓度。

2、如果肉汤颜色很深，把未接种试管放在标准管的后面读数即可。

3、测定好的细菌，可以做一下梯度稀释涂布计数。

4、此种方法测定的准确性不是很高，如果是对细菌数量要求较精确的，请用紫外分光光度计。

5、麦氏比浊液应放室温暗处保存，用前混匀，有效期为6个月。应用时为了准确也可以使用比浊仪但一定要防止麦氏浊度标准管未摇匀或已过期失效。

在微生物学检验中，麦氏比浊法常作为细菌鉴定、实验配制菌液时大致判断细菌菌液浓度的一种方法，通常认为，如将配细菌菌液浓度配成0.5麦氏比浊管时，相当于1.0×108细菌数/ml，由于方法本身就是一种估计的方法，所以尽管不同细菌大小差异很大，但除了真菌孢子，细菌的差别不大，结果不会有影响。

附孢子菌悬液制作方法：

1. 菌种活化

将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中，培养7d～14d，使生成大量孢子。未制备孢子悬液时，不得拔去棉塞。每打开1支只供制备1次悬液，每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。

2. 孢子悬液制备

在上述PDA斜面培养基中加入少量无菌蒸馏水，用无菌接种环轻轻刮取表面的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于250mL锥形瓶内，然后注入40mL洗脱液。

锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒～15粒与孢子混合，具塞后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开，然后用单层棉纱布过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中，用离心机分离沉淀孢子，去上清液。再加入40mL洗脱液，重复离心操作3次。制成浓度为(0.8～1.2)×106spores/mL的霉菌孢子悬液。若需要精确计数，则可以用改良察氏液体培养基稀释孢子悬液，用血球计数板计数。孢子悬液应在当天使用，若不在当天使用应在 3℃～7℃保存，并尽量在4d内使用。