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【环凯原创】有趣的细菌拉丝试验 — 快速区分革兰氏阳性菌和阴性菌
发布时间： 2023-06-30 点击次数： 2626次
是否有想知道平板上的分离菌的到底是革兰氏阴性还是阳性菌，却因没有革兰氏染色或没有显微镜或不会革兰氏染色操作而不知所措？或者，革兰氏染色后还不确定标本测试菌是革兰氏阴性还是阳性菌的？
下面给大家介绍个简单又有趣的解决方法 —— 细菌拉丝试验，不需染色剂不需显微镜，一分钟轻松区分革兰氏阳性菌和阴性菌。
此法在1970年Smith【1】首先报道应用去氧胆酸钠溶液做拉丝试验区分弧菌与非弧菌（如气单胞菌属细菌），初步鉴别霍乱弧菌；1981年Shushan等【2】和1983年Agbonlahor等【3】相继应用氢氧化钾溶液做拉丝试验区分革兰氏阳性菌和阴性菌。
目前国内细菌拉丝试验主要也是应用于两个方面：一是用于霍乱弧菌初步鉴别【4】，二是用于区分革兰氏阳性菌和阴性菌【5-8】。
区分革兰氏阳性菌和阴性菌的拉丝试验方法【6】：取一张洗净玻片， 滴加25g/L氢氧化钾水溶液一滴，根据菌落大小，从平板上挑取单个菌落或数个纯培养菌落，置于氢氧化钾滴液中研磨，经15-60秒， 自混悬液中轻轻提起接种环，仔细观察；60秒内混悬物中形成黏液状并可拉成细丝（5mm以上）为阳性（对应是革兰氏阴性菌），60秒混悬物均匀不出现细丝者为阴性（对应是革兰氏阳性菌）。
为什么会是这样的结果？
目前有两种说法，第一种说法是革兰氏阴性菌的细胞壁在稀碱氢氧化钾溶液中容易裂解，裂解后释放出DNA，使氢氧化钾溶液变为粘稠并形成粘丝，反之，稀氢氧化钾对此革兰氏阳性菌无此作用【5】；第二种说法是与细胞壁化学结构有关，在氢氧化钾作用下革兰氏阴性菌的细胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂质被皂化而形成粘稠物，致拉丝试验阳性，而革兰氏阳性菌细胞壁主要成分是粘肽，氢氧化钾不能使其形成粘稠物，故拉丝试验阴性。革兰氏阴性经过氢氧化钾溶液处理后再革兰氏染色镜检，发现菌体细胞壁溶解，呈模糊絮片状，细胞壁有不同程度的损伤，接种适宜培养基上不能生长繁殖，而革兰氏阳性菌无此现象【6-7】。
其实，这两种说法都是认为与革兰氏阳性和阴性菌细胞壁结构成分有关，所以此法可用于区分革兰氏阳性和阴性菌。但至于粘稠的物质是DNA还是革兰氏阴性菌细胞壁类脂物质被氢氧化钾皂化形成的，要阐明还有待进一步的研究。
拉丝试验区分革兰氏阳性菌和阴性菌的准确性：相关研究报道表明【6-8】，氢氧化钾拉丝试验结果与革兰氏染色一致，二者符合率为100%。拉丝试验不但能正确区别革兰氏阴性菌和阳性菌，还有助于复核革兰氏染色结果的正确性，也是革兰氏染色质控的有力措施。
但拉丝试验结果也会受到试剂、菌量、菌型等因素影响【6】，所以为了保证该试验结果的准确，操作时需注意：
1）氢氧化钾溶液的浓度在20-50g/L较佳【8】，浓度过低会出现假阴性结果；
2）挑取菌量多少也很重要，菌落直径1.5-3mm，取1/2-1个菌落，如菌落直径小于1mm，取2-3个菌落，菌量过少反应迟缓甚至出现假阴性结果；
3）光滑（S）型与粗糙(R）型菌落进行试验， R型革兰氏阴性菌虽能出现拉丝现象但比S型革兰氏阴性菌慢，且菌量过少时呈阴性反应，因此，对于R型菌落的菌量宜相应多取。
参考文献：
1,Smith HL Jr. A Presumptive test for vibros: The “String" Test. Bull WHO,1970,42:817.
2,Shushan H.快速区分革兰氏阳性与阴性厌氧菌的辅助方法。国外医学：微生物学分册，1982，1：47.
3,Agbonlahor DE, Odugbemi Phd To,Udofia PO. Differentiation of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria and Yeasts Using a Modification of the “String" Test. Amer J Med Techn,1983,49:177.
4,卫生部《霍乱防治手册》第六版(2013年)
5,张崑. 应用氢氧化钾法区分革兰氏阴、阳性细菌的探讨. 中国医科大学学报 1983年12卷4期:97.
6,解晓珍，田洪明，舒亦平，潘绍武.细菌拉丝试验的应用探讨. 第三军医大学学报,1995年第17卷第1期：67-68.
7,张素萍，路高社. 拉丝试验的应用及其影响因素的观察. 北京军qu医药 1995年第7卷第4期:312-313.
8,王秀芹.氢氧化钾拉丝试验与革兰氏染色的应用比较. 齐鲁医学检验，2004年第15卷第3期：54.
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