脉冲式均质器在食品微生物快速检测中应用研究

         脉冲式均质器在食品微生物快速检测中应用研究

   随着经济的发展，人民对食品安全性的要求也日益提高，如何更快更好的检测出食品能否放心食用就显得尤为重要。微生物指标是食品检测中一个重要的指标，而传统的检测方法操作准备繁琐且样品前处理带有一定的缺陷和局限性。为了提高检测效率，微生物检测可使用快速检测方法。现行上常用的快速检测方法为使用快速测试片。由于测试片上含有冷水可溶性凝胶，因此无需传统方法中倾倒琼脂的步骤，从而避免了对细菌可能造成的热损伤。相对于传统平板检测方法操作简便、结果稳定，具有良好的实用性能，可大大简化操作程序，提高检测速度[1]。为了快速检测方法能更好的开展，选择适宜的样品前处理的均质方式可使检测数据更真实可靠。本文通过研究新式的脉冲式均质器与传统的拍打式、旋转搅拌式在使用效果上的差异，以得出使用脉冲式均质器在食品微生物快速检测中更优的结论。

  一.材料

（1） 试验材料

  美国3M公司细菌总数测试片，美国3M公司酵母菌/霉菌测试片，检测样品来源于市场随机购买。

（2） 主要培养基

平板计数琼脂培养基、孟加拉红培养基、伊红美蓝琼脂、Baird-Parker 琼脂基础、亚硫酸铋（BS）琼脂。以上培养基均由广东环凯微生物科技有限公司提供。

（3） 主要仪器设备

ShockMixer-1 脉冲式样品前处理器（环凯制造）、拍打式均质器、搅拌式均质器、振荡器、高压蒸气灭菌锅、超净工作台、电子天平、移液枪、生化培养箱。

（4） 菌株

大 肠 埃 希 菌 [CMCC（B）44102] 、金黄色葡萄球菌[CMCC26003]、福氏志贺氏菌[CMCC（B）51572]、乙型副伤寒沙门氏菌[CMCC51572]。以上菌种均由广东环凯微生物科技有限公司提供。

（5） 脉冲式均质器的工作原理

通过高频率震动内装食品样品的胶袋，产生强烈冲击波与高速搅动联合作用，将食品中的微生物驱赶到样品悬液中，形成菌浓度均匀的样品稀释液。减轻了对样品的破坏，从而极大地减少了样品碎片的产生。食品样液澄清度高，能与快速检测方法更配套。

 二.试验方法

1.平板法

   脉冲式均质器的操作步骤为，取一无菌袋打开置于天平上称取25 g样品，倒入所需225 mL无菌生理盐水，置于脉冲均质器的振荡环中，脉冲时间设30 s，运行均质。再分别依照GB/T4789.2-2010 ， GB4789.4-2010 ， GB/T4789.10-2010 ，GB/T4789.15-2010，GB/T4789.5-2003进行。

2.快速测试法

22.1 细菌总数快速测试片法

（1）利用脉冲均质器把样品制成1∶10的样品匀液，按样品的特性再进一步稀释为1∶100，1∶1000等浓度的供试液。

（2）在平坦的实验台表面解开测试片的上层膜，用移液枪吸取1 mL样品供试液，垂直滴加在测试片的中央。把上层膜盖下或直接落下，但不可滚动上层膜。使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。每个

样品做2个平行试验。

（3）测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，水平置于培养箱内

36±1 ℃培养48±2 h。

2.2.2 酵母菌霉菌快速测试片法

（1）样品前处理同2.2.1（1）。

（2）测试片使用方法同2.2.1（2）。

（3）将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内21~25 ℃培养3~5 d。

3 结果与讨论

3.1 脉冲式均质器对微生物的杀灭影响用现行国标平板计数法分别检测大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌的菌悬液。把各一定浓度的菌悬液分别以15 s、30 s、60 s、180 s 的脉冲时间处理，检测脉冲波处理是否会对微生物生存造成不利影响，结果见表1。由实验结果可见脉冲处理不影响大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌的生存，不对其构成杀灭作用。

表1 脉冲前处理对标准菌株生存的影响

3.2 比较试验

对市场上随机购买的5个样品分别采用脉冲式均质器、拍打式均质器与旋转搅拌式均质器进行前处理后利用微生物快速测试片，对检品的菌落总数和霉菌进行快检。同时用脉冲法前处理后的样液做国标的平板法，结果见表2。从表中可看出脉冲式前处理后，使用快速测试纸片法测菌落总数与霉菌的结果，与用脉冲式

前处理后用传统的国标平板法得出的数据相同，说明使用食品快速测试纸片测定菌落总数与霉菌的结果是可信的。而对比脉冲式、拍打式和旋转搅拌式前处理的数据，可说明脉冲式的均质效果更好，检测数据更接近实际菌数。

4 结论

在市面上流通的食品，大部分都属于快速消费品，因此提高此类快消品的微生物检测速度和准确度，对有效的保证食用人群的身体健康具有重要的意义。在微生物快速检测中，采用快速测试片是常用的方法。此方法具有显著的优点：

*:减少培养基配制工作，可及时检测，缩短准备时间。

第二:在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实的细菌数。

第三:不需要大量的玻璃器皿，操作简便；易于保存，便于运输，工作量小。

避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。在食品的微生物快速检测中，样品前处理的好坏会影响快速检测的准确度。现时上比较新式的方法是使用脉冲式均质器。这种方法优于目前国内普遍使用的拍打式和旋转搅拌式均质器。脉冲式前处理对食品中微生物无杀灭作用，通过与国标方法对比，证实检测效果良好，可以应用于微生物快速检验工作中。脉冲式均质器的优点有：

*，减少食品碎片的产生，zui大限度地减少对一些快速检验方法的干扰因素。

第二，无需打碎样品，不会导致样品处理袋的破裂。

第三，样品碎片较少，样品液澄清，易于取样，易于过滤，节省时间。

第四，的样品处理方法微生物的释放效果等同甚至优于其他方法。世界上已有一些国家或组织批准了这种方法，如标准化组织在《ISO7218：2007食品与饲料中微生物微生物学检验总的要求与指导》第三版5.4中，把脉冲均质法列为三种仪器样品均质前处理方法之一[2]。因此，在微生物快速检测中，使用脉冲式均质器均质可提高工作效率和减少检测的干扰性，应大力推广应用于食品微生物快速检测前处理中。