布鲁氏菌核酸快速检测试剂盒(恒温荧光法)

产品名称：布鲁氏菌（牛、猪、羊）核酸快速检测试剂盒
英文名称：Rapid Detection kit for Brucella spp

产品编号与包装规格：

产品简介：本试剂盒基于环介导的恒温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于主要感染牛、猪、羊种布鲁氏菌的快速检测，可通过肉眼观察反应管中试剂颜色变化判读结果。

检测原理：利用两对特殊引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶，使模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，引物顺利与模板结合并进行链置换扩增反应，实现在恒温条件下（60-65℃）进行连续快速扩增。反应加入显色指示剂，阴阳性结果显色差异显著，可直接通过颜色变化判读结果。

产品特点：
      1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用时减少溶液配制步骤，更为便捷，整个检测反应可在1 h内完成；
      2. 特异性高：利用靶基因序列上的多个独立区域设计多条引物，保证扩增反应的高度特异性；
      3. 灵敏度高：最-低检验限达到10 CFU/Test；
      4. 判读简单：反应前加入显色指示剂，反应后通过肉眼观察反应液颜色变化或者经荧光监测仪器跟踪荧光图谱的变化判读结果，直观方便，且可有效避免反应后开盖造成的气溶胶污染。

布鲁氏菌核酸快速检测试剂盒产品组分：

注：显色指示剂使用前请低速离心

储存条件与保质期：2~8℃条件下储存，有效期为12个月。

适用仪器：
      1. PCR仪器或金属浴恒温器，如果检测样品为DNA样品，水浴锅即可。
      2. 高速离心机，样品的前处理需要用高速离心机做分离。

样品处理：

   1. 微生物样品前处理：实验室中的布鲁氏菌在合适的固体培养基中划线培养，往200 μL PCR管中加入30 μL裂解液，挑取布鲁氏菌菌至裂解液中充分悬浮，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min进行灭活和热裂解处理。12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至200 μL PCR管中，在-20℃保存备用。

   2. 在步骤1中培养的布鲁氏菌可用细菌DNA-提取-试剂盒按照说明书指导提取布鲁氏菌DNA，-20℃保存备用。
      注：活性布鲁氏菌，可感染人畜，具有高度传染性，操作时需按照相应生物安全等级操作规范进行。

   3. 临床样本处理：用商品化试剂盒按照操作说明书中从血清样本中提取DNA，-20℃保存备用。

恒温荧光法核酸快速检测试剂盒操作流程

布鲁氏菌核酸快速检测试剂盒使用指南：

1，阴、阳性对照和干粉试剂复溶

   A. 阴、阳性对照复溶：首-次使用时，加入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照冻干粉中，待溶解后混匀，-20℃存储待用 。
   B. 干粉试剂复溶：取出冻干粉试剂，按照需求剪取n个检测试剂管（n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每管加入20 μL复溶液，完-全溶解后待用。

2，扩增反应
   A. 打开能够提供恒温条件的仪器，设置到64℃待用；
   B. 向上述已加入复溶液的n个反应管中各加入显色指示剂2.5 μL；
   C. 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品DNA、阴性对照、阳性对照各2.5 μL，盖紧盖子；
   D. 将所有的反应管置于恒温仪器中，反应55 min。

3，结果判读：反应结束后，建议在自然光线充足的环境条件下，将样品置于白色背景下观察结果，阴性对照检测试剂管呈淡橙色，阳性对照检测试剂管呈荧光绿，待测样品反应管以此作为对照进行判读，若阴阳对照反应管任一结果与上述情况不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。

恒温荧光法核酸快速检测试剂盒灵敏度对比

布鲁氏菌核酸快速检测试剂盒(恒温荧光法)用于感染牛和猪种布鲁氏菌的快速检测。

布鲁氏菌核酸快速检测试剂盒(恒温荧光法)用于感染牛和猪种布鲁氏菌的快速检测。